GFAP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400130-ACT

グリア線維性酸性タンパク質（GFAP）は、中間径フィラメントタンパク質であり、アストロサイトの同一性を規定するとともに、中枢神経系における細胞骨格の組織化、細胞の機械的安定性、突起のリモデリングに寄与する。GFAPの動態は、アストロサイトの反応性（リアクティビティ）プログラムや、グリオーシス、神経炎症、組織修復応答を調節するJAK/STATやMAPKなどのシグナル伝達ネットワークと交差している。GFAPの発現量やフィラメント構造の変化は、神経疾患および神経変性疾患におけるアストロサイト機能不全と関連しており、GFAPはアストロサイトの活性化状態および系譜を示す分子指標として広く用いられている。GFAPを実験的に操作することは、アストロサイトの成熟、ニューロン—グリア相互作用、ストレス応答性の細胞骨格リモデリングの研究に有用である。

GFAP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GFAPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GFAP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GFAP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGFAP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GFAPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGFAP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGFAP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGFAP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGFAP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。