Plasmide Double Nickase (h) GEN1: sc-410437-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GEN1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GEN1 Double Nickase (h) et le plasmide GEN1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GEN1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GEN1 | sc-410437-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GEN1 | sc-410437-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GEN1 code une endonucléase spécifique de structure qui résout les jonctions de Holliday et d’autres intermédiaires de recombinaison au cours de la recombinaison homologue, contribuant à l’achèvement de la réparation des cassures double brin de l’ADN et à une ségrégation correcte des chromosomes. Elle intervient dans des voies de maintenance du génome à l’interface de la réparation associée à la réplication, de la signalisation des points de contrôle et de la restauration des fourches de réplication bloquées ou effondrées. La perturbation de l’activité de GEN1 peut accroître l’instabilité chromosomique et la formation de micronoyaux, reliant une résolution défectueuse des jonctions à une augmentation de la charge mutationnelle dans les tissus prolifératifs. Par conséquent, GEN1 est fréquemment étudiée dans le contexte de l’organisation des réseaux de réparation de l’ADN, des réponses au stress de réplication et des mécanismes qui façonnent les réarrangements génomiques associés au cancer.
GEN1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GEN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GEN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GEN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GEN1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.