Plasmide CRISPR/Cas9 KO Gelsolin (h): sc-401005

Présentation

GSN code la gelsoline, une protéine liant l’actine régulée par le calcium, qui sectionne et coiffe les filaments d’actine afin de contrôler le remodelage du cytosquelette et la mécanique cellulaire. En modulant la dynamique de polymérisation de l’actine, la gelsoline contribue à des processus tels que la motilité cellulaire, l’adhérence, l’endocytose et l’apoptose, et elle interagit avec des voies de signalisation qui régissent les réponses au stress et le trafic membranaire. Des altérations de l’expression de GSN ou de l’activité de la gelsoline ont été associées à des modifications du remodelage tissulaire et des microenvironnements inflammatoires, et font l’objet de nombreuses études dans le contexte de l’invasion des cellules cancéreuses, de la neurodégénérescence et de la biologie cardiovasculaire. En tant que régulateur clé du renouvellement des filaments d’actine, la gelsoline constitue une cible accessible pour l’analyse de phénotypes dépendants de l’actine dans divers modèles de cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Gelsolin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GSN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GSN, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GSN à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Gelsolin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GSN pour l'étude de la signalisation de Gelsolin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GSN essentiels à la fonction de Gelsolin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GSN pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Gelsolin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Gelsolin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GSN. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Gelsolin plasmide HDR (h) et le Gelsolin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GSN pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GSN définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.