Plasmide CRISPR/Cas9 KO GEFT (h): sc-406707

Présentation

ARHGEF25 code pour GEFT, un facteur d’échange de nucléotides guanyliques (GEF) des protéines Rho qui active des GTPases de la famille Rho telles que Rac1 et Cdc42 afin de coordonner le remodelage du cytosquelette d’actine, la polarité cellulaire et la motilité. La signalisation médiée par GEFT s’interface avec des voies dépendantes des GTPases Rho qui contrôlent la dynamique des adhésions focales, la formation de replis membranaires (membrane ruffling) et la croissance des neurites, reliant des signaux extracellulaires à des programmes transcriptionnels et morphologiques en aval. Une signalisation Rho GTPase dérégulée et une activité altérée d’ARHGEF25 ont été associées à des phénotypes de migration et d’invasion anormaux en biologie du cancer, ainsi qu’à des défauts plus larges d’organisation du cytosquelette pertinents dans des contextes neurodéveloppementaux et inflammatoires. En tant que nœud en amont de multiples effecteurs dépendants de Rho, GEFT est fréquemment étudié pour disséquer les mécanismes de morphogenèse, d’adhérence et de transduction du signal.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GEFT (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ARHGEF25 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ARHGEF25, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ARHGEF25 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GEFT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ARHGEF25 pour l'étude de la signalisation de GEFT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ARHGEF25 essentiels à la fonction de GEFT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ARHGEF25 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GEFT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GEFT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ARHGEF25. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GEFT plasmide HDR (h) et le GEFT (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ARHGEF25 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ARHGEF25 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.