GEFT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406707

Übersicht

ARHGEF25 kodiert GEFT, einen Rho-Guaninnukleotid-Austauschfaktor, der Rho-Familien-GTPasen wie Rac1 und Cdc42 aktiviert, um den Umbau des Aktinzytoskeletts, die Zellpolarität und die Zellmotilität zu koordinieren. Die durch GEFT vermittelte Signalgebung ist mit Rho-GTPase-abhängigen Signalwegen verknüpft, die die Dynamik fokaler Adhäsionen, Membranruffling und das Neuritenwachstum steuern, und koppelt extrazelluläre Signale an nachgeschaltete transkriptionelle und morphologische Programme. Eine fehlregulierte Rho-GTPase-Signalgebung und veränderte ARHGEF25-Aktivität wurden in der Krebsbiologie mit aberranten Migrations- und Invasionsphänotypen sowie mit weiterreichenden Defekten der Zytoskelettorganisation in neuroentwicklungs- und entzündungsrelevanten Kontexten in Verbindung gebracht. Als Knotenpunkt stromaufwärts mehrerer Rho-abhängiger Effektoren wird GEFT häufig untersucht, um Mechanismen der Morphogenese, Adhäsion und Signaltransduktion zu entschlüsseln.

Das GEFT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ARHGEF25-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ARHGEF25-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ARHGEF25 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GEFT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ARHGEF25-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GEFT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ARHGEF25-Exone abzielen, die für die GEFT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ARHGEF25-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GEFT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GEFT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ARHGEF25-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GEFT HDR-Plasmid (h) und GEFT HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ARHGEF25-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ARHGEF25-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.