GDF-8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400693-ACT

O MSTN humano codifica o fator de crescimento/diferenciação 8 (GDF-8, miostatina), um ligante secretado da superfamília TGF-β que atua como um potente regulador negativo do crescimento do músculo esquelético. O GDF-8 sinaliza principalmente por meio de receptores de activina tipo II e da fosforilação a jusante de SMAD2/3 para limitar a proliferação e a diferenciação de mioblastos, ao mesmo tempo que influencia o turnover proteico e programas gênicos metabólicos. Esse eixo interage com vias que controlam a miogênese, a remodelação da matriz extracelular e a sinalização inflamatória no músculo. A atividade desregulada de MSTN/GDF-8 tem sido associada a fenótipos de massa muscular alterada e é frequentemente estudada no contexto de perda muscular, sarcopenia e biologia de doenças neuromusculares.

GDF-8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MSTN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GDF-8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MSTN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MSTN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GDF-8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MSTN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GDF-8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GDF-8 em células tumorais com expressão de MSTN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.