GDF-11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400969-ACT

O fator de diferenciação do crescimento 11 (GDF11; GDF-11) é um ligante secretado da superfamília TGF-β que sinaliza por meio de receptores de ativina dos tipos II e I para ativar programas transcricionais dependentes de SMAD2/3. Em células humanas, o GDF11 regula a padronização do desenvolvimento, decisões de destino celular e a homeostase tecidual, com efeitos a jusante sobre proliferação, diferenciação e remodelamento da matriz extracelular. Alterações na expressão ou na sinalização de GDF11 têm sido estudadas em contextos que envolvem remodelamento muscular e cardíaco, processos do neurodesenvolvimento e vias relevantes para o câncer, como a transição epitélio–mesênquima e interações com o estroma. Como um fator circulante semelhante a um morfógeno, o GDF11 também é utilizado para investigar dinâmicas de sinalização parácrina e o crosstalk entre vias mediadas por receptores.

GDF-11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GDF11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GDF-11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GDF11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GDF11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GDF-11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GDF11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GDF-11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GDF-11 em células tumorais com expressão de GDF11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.