Plasmide CRISPR/Cas9 KO GDF-10 (h): sc-406826

Présentation

GDF10 code le facteur de différenciation et de croissance 10 (GDF‑10), un ligand sécrété de la superfamille du TGF‑β impliqué dans la régulation de la différenciation cellulaire, la mise en place des tissus et le remodelage de la matrice extracellulaire. GDF‑10 transmet son signal via des récepteurs à activité sérine/thréonine kinase, activant des programmes transcriptionnels canoniques dépendants des SMAD et s’inscrivant dans un crosstalk plus large des voies TGF‑β/BMP qui façonne les décisions de destin cellulaire et les réponses stromales. Dans la littérature, des altérations de l’expression de GDF10 ont été associées à des processus de développement dérégulés et à des programmes de remodelage aberrants pertinents pour des microenvironnements fibrosants et associés aux tumeurs. In vitro, GDF‑10 est fréquemment étudié pour ses effets sur l’engagement de lignée, la migration et le contrôle de la croissance dépendant du contexte dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GDF-10 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GDF10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GDF10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GDF10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GDF-10.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GDF10 pour l'étude de la signalisation de GDF-10, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GDF10 essentiels à la fonction de GDF-10
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GDF10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GDF-10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GDF-10 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GDF10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GDF-10 plasmide HDR (h) et le GDF-10 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GDF10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GDF10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.