GCSH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406784

Übersicht

GCSH kodiert das H-Protein des Glycin-Spaltungssystems, einen mitochondrialen, lipoattragenden Carrier, der Reaktionszwischenprodukte zwischen der Glycin-Decarboxylase (P-Protein), der Aminomethyltransferase (T-Protein) und der Dihydrolipoamid-Dehydrogenase (L-Protein) weiterleitet. Über diesen Multienzymkomplex unterstützt GCSH den Glycinabbau und den Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsel, indem es den Abbau von Glycin an den folatabhängigen Transfer von C1-Einheiten koppelt und so den mitochondrialen Aminosäureumsatz mit dem zellulären Redox- und Stoffwechselgleichgewicht verknüpft. Eine Störung der Glycinspaltungsaktivität wird mit veränderter mitochondrialer Funktion und einem Ungleichgewicht im Glycin-/Serin-Fluss in Verbindung gebracht – Prozesse, die für neurometabolische Dysregulation relevant sind. Als Knotenpunkt, der lipoatabhängige Enzymologie mit folatvermittelten Signal- und Stoffwechselwegen verbindet, wird GCSH häufig im Kontext des mitochondrialen Stoffwechsels, von Reaktionen auf oxidativen Stress und angeborenen Störungen der Glycinverwertung untersucht.

Das GCSH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GCSH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GCSH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GCSH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GCSH-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GCSH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GCSH-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GCSH-Exone abzielen, die für die GCSH-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GCSH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GCSH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GCSH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GCSH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GCSH HDR-Plasmid (h) und GCSH HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GCSH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GCSH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.