Plasmide Double Nickase (h) GCSFR: sc-402269-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) G-CSFR correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide G-CSFR Double Nickase (h) et le plasmide G-CSFR Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CSF3R. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: G-CSFR Antibody (A-7): sc-514639
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GCSFR | sc-402269-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) G-CSFR | sc-402269-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CSF3R code pour le récepteur du facteur de stimulation des colonies de granulocytes (GCSFR), un récepteur de cytokines de type I qui régule la production, la maturation et l’activation fonctionnelle des neutrophiles au sein de la lignée myéloïde. Après liaison du ligand, le GCSFR signale principalement via les cascades JAK/STAT, PI3K/AKT et MAPK afin de contrôler la prolifération, la survie, la différenciation et le trafic des progéniteurs granulocytaires. Une régulation stricte de la signalisation de CSF3R est essentielle à l’homéostasie hématopoïétique, et une activité altérée du récepteur a été associée à une myélopoïèse désorganisée et à une transformation leucémique dans de multiples contextes pathologiques. Parce que CSF3R intègre les signaux cytokiniques à des programmes transcriptionnels contrôlant la granulopoïèse, il est fréquemment étudié dans des modèles d’inflammation, de développement de l’immunité innée et de mécanismes des hémopathies malignes myéloïdes.
G-CSFR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CSF3R dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CSF3R. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CSF3R. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CSF3R.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.