Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (m) GCN5: sc-420512-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) GCN5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GCN5 Double Nickase (m) et le plasmide GCN5 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Kat2a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GCN5 Antibody (A-11): sc-365321
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) GCN5 | sc-420512-NIC | 20 µg | $410.00 |
Kat2a code pour GCN5, une lysine acétyltransférase qui dépose des marques d’acétylation des histones telles que H3K9ac et H3K14ac afin de favoriser une chromatine ouverte et l’activation transcriptionnelle. Dans les cellules de souris, GCN5 agit au sein de complexes coactivateurs de type SAGA et ATAC, en coordonnant la transcription par l’ARN polymérase II avec le remodelage de la chromatine lors de la progression du cycle cellulaire, des réponses aux dommages de l’ADN et des programmes de différenciation. L’activité de Kat2a/GCN5 s’inscrit à l’interface de réseaux de régulation génique du développement et de l’hématopoïèse et influence des voies liées au contrôle du destin cellulaire. Une acétylation de la chromatine dérégulée impliquant GCN5 a été associée à des phénotypes prolifératifs et à des états transcriptionnels altérés pertinents pour la biologie du cancer et du neurodéveloppement, ce qui étaye des études mécanistiques en régulation épigénétique.
GCN5 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Kat2a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Kat2a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Kat2a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Kat2a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.