Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
GCN5 Plasmide Double Nickase (h): sc-400767-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GCN5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GCN5 Double Nickase Plasmid (h) e il GCN5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KAT2A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GCN5 Antibody (A-11): sc-365321
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GCN5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400767-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GCN5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400767-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KAT2A codifica la lisina acetiltransferasi GCN5, una subunità catalitica dei complessi coattivatori SAGA/ATAC che acetilano l’istone H3 (in particolare H3K9 e H3K14) per favorire l’accessibilità della cromatina e l’attivazione trascrizionale. Attraverso una regolazione coordinata dell’attività di enhancer e promotori, GCN5 influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA e programmi di differenziamento specifici di linea. GCN5 acetila anche substrati non istonici, collegando le dinamiche di acetilazione alle reti di segnalazione e allo stato metabolico. Un’attività deregolata di KAT2A/GCN5 e pattern alterati di acetilazione degli istoni sono stati associati a programmi trascrizionali oncogenici e a disturbi dello sviluppo, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo epigenetico dell’espressione genica.
GCN5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KAT2A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KAT2A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KAT2A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KAT2A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.