GCK Double Nickase Plasmid (h): sc-400852-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GCK Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GCK Double-Nickase-Plasmid (h) und GCK Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GCK abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GCK: sc-17819
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GCK Double Nickase Plasmid (h) | sc-400852-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GCK Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400852-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Glukokinase (GCK) kodiert das Enzym Hexokinase IV, das Glukose zu Glukose-6-phosphat phosphoryliert, und fungiert als zentraler Glukosesensor, der die extrazelluläre Glukoseverfügbarkeit mit dem zellulären Stoffwechsel koppelt. In pankreatischen β-Zellen trägt die GCK-Aktivität dazu bei, die Schwelle für die glukoseinduzierte Insulinsekretion festzulegen, während sie in Hepatozyten den glykolytischen Flux und die Glykogensynthese unterstützt – durch Einbindung in die Glykolyse, die Regulation der Glukoneogenese und kohlenhydratresponsive Stoffwechselprogramme. Indem GCK den Eintritt von Glukose in den zentralen Kohlenstoffstoffwechsel steuert, beeinflusst es das ATP/ADP-Gleichgewicht, metabolitengesteuerte Signalwege und nachgeschaltete Pfade, die mit Insulinsekretion und hepatischer Glukoseverwertung verknüpft sind. Genetische und funktionelle Störungen von GCK sind stark mit einer veränderten Glukosehomöostase und monogenen Formen der Dysglykämie assoziiert, weshalb GCK häufig als Ziel in mechanistischen Studien zur Stoffwechselregulation genutzt wird.
GCK Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GCK-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GCK abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GCK-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GCK-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.