Plasmide Double Nickase (h) GCH-I: sc-402386-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GCH-I correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GCH-I Double Nickase (h) et le plasmide GCH-I Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GCH1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GCH-I Antibody (G-8): sc-376483
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GCH-I | sc-402386-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GCH-I | sc-402386-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GCH1 code la GTP cyclohydrolase I (GCH-I), l’enzyme limitante de la biosynthèse de novo de la tétrahydrobioptérine (BH4) à partir du GTP. La BH4 est un cofacteur essentiel, actif sur le plan rédox, pour les hydroxylases des acides aminés aromatiques et pour toutes les isoformes des NO-synthases, reliant ainsi l’activité de la GCH-I à la production de catécholamines et de sérotonine, ainsi qu’à la signalisation du monoxyde d’azote et à l’équilibre rédox cellulaire. Une altération de la fonction de GCH1 peut perturber le métabolisme des neurotransmetteurs et les voies endothéliales du monoxyde d’azote, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’homéostasie neurométabolique, de la biologie vasculaire et du stress oxydatif. Des variants de GCH1 sont associés à des troubles héréditaires des neurotransmetteurs et ont été étudiés dans le contexte de la sensibilité à la douleur et de phénotypes neuropsychiatriques, soutenant des recherches mécanistiques sur les relations entre génotype et voies biologiques.
GCH-I Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GCH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GCH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GCH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GCH1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.