Plasmide CRISPR/Cas9 KO GCDH (h): sc-405887

Présentation

Le gène humain **GCDH** code la **glutaryl‑CoA déshydrogénase**, une flavoprotéine mitochondriale qui catalyse la **décarboxylation oxydative** du glutaryl‑CoA en **crotonyl‑CoA** au cours du catabolisme de la **lysine**, de l’**hydroxylysine** et du **tryptophane**. Cette réaction relie la dégradation des acides aminés au métabolisme énergétique mitochondrial et à l’homéostasie rédox via un transfert d’électrons dépendant du **FAD**. L’activité de GCDH influence l’équilibre des **acyl‑CoA** et des **acides organiques**, modulant les réponses mitochondriales au stress et le remodelage métabolique en fonction des variations d’apport en nutriments. Des variants avec perte de fonction sont associés à l’**acidémie glutarique de type I**, et GCDH est fréquemment étudié dans le contexte de la vulnérabilité neurométabolique, de la dysfonction mitochondriale et de l’accumulation d’acides organiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GCDH (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GCDH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GCDH, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GCDH à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GCDH.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GCDH pour l'étude de la signalisation de GCDH, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GCDH essentiels à la fonction de GCDH
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GCDH pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GCDH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GCDH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GCDH. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GCDH plasmide HDR (h) et le GCDH (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GCDH pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GCDH définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.