Plasmide CRISPR d'Activation (h) GCDFP-15: sc-404430-ACT

PIP code pour la GCDFP-15 (protéine inductible par la prolactine), une glycoprotéine sécrétée fortement exprimée dans les épithéliums associés aux glandes apocrines et régulée par la signalisation des hormones stéroïdiennes. La GCDFP-15 participe à des interactions protéiques extracellulaires et est couramment utilisée comme marqueur moléculaire des états de différenciation épithéliale, reflétant des programmes transcriptionnels liés à la sensibilité hormonale. Ses profils d’expression sont fréquemment évalués dans des études portant sur le sein et d’autres tissus glandulaires, où des variations des niveaux de PIP/GCDFP-15 sont corrélées à des changements de la biologie des sous-types tumoraux et à des caractéristiques de lignée cellulaire. En tant que facteur sécrété, la GCDFP-15 soutient également les recherches sur la signalisation du microenvironnement et sur les lectures de voies associées à des biomarqueurs.

GCDFP-15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PIP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GCDFP-15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PIP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PIP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GCDFP-15. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PIP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GCDFP-15 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GCDFP-15 dans les cellules tumorales présentant une expression de PIP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.