Plásmido Doble Nickase (h) GC-C: sc-403413-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GC-C consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GC-C (h) y el plásmido de doble nickasa GC-C (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GUCY2C. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GC-C Anticuerpo (537): sc-100302
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GC-C | sc-403413-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GC-C | sc-403413-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GUCY2C codifica la guanilato ciclasa C (GC-C), un receptor transmembrana que convierte GTP en cGMP en respuesta a ligandos extracelulares, regulando así el transporte iónico epitelial y la homeostasis de líquidos. La señalización de cGMP impulsada por GC-C activa efectores aguas abajo como PKG y fosfodiesterasas moduladas por cGMP para ajustar el transporte de membrana, la función de barrera y programas del estado celular en tejidos mucosos. Las alteraciones en la expresión o la señalización de GUCY2C se han asociado con una fisiología epitelial desregulada y se estudian en el contexto de procesos inflamatorios intestinales y de la transformación epitelial. Como receptor epitelial asociado a linaje, GC-C también se utiliza como una herramienta molecular para explorar respuestas de señalización específicas de tejido y la biología de marcadores en modelos celulares humanos.
GC-C El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GUCY2C en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GUCY2C. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GUCY2C. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GUCY2C alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.