Plasmide CRISPR/Cas9 KO GBP4 (h): sc-405870

Présentation

La protéine de liaison au guanylate 4 (GBP4) est une grande GTPase inductible par les interférons qui participe à l’immunité intrinsèque des cellules en aval de la signalisation des interférons de type I et de type II. GBP4 est impliquée dans des programmes effecteurs de l’immunité innée qui modulent la restriction des agents pathogènes, la signalisation inflammatoire et les réponses antivirales, avec des liens fonctionnels aux réseaux transcriptionnels pilotés par JAK–STAT et aux voies des gènes stimulés par les interférons. En influençant les états d’activation des cellules immunitaires et les processus régulés par les cytokines, l’expression et l’activité de GBP4 sont fréquemment étudiées dans des contextes de biologie des infections et de physiopathologie associée à l’immunité. Son rôle dans la coordination de réponses dépendantes des GTPases fait de GBP4 un nœud utile pour étudier le remodelage des programmes de défense cellulaire en fonction des stimuli.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GBP4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GBP4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GBP4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GBP4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GBP4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GBP4 pour l'étude de la signalisation de GBP4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GBP4 essentiels à la fonction de GBP4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GBP4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GBP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GBP4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GBP4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GBP4 plasmide HDR (h) et le GBP4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GBP4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GBP4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.