Plasmide CRISPR d'Activation (h) GBP1: sc-401778-ACT

Le GBP1 humain (guanylate binding protein 1) est une grande GTPase inductible par l’interféron qui agit comme effecteur antimicrobien et inflammatoire en aval de la signalisation JAK–STAT. GBP1 s’associe aux membranes intracellulaires et aux compartiments contenant des agents pathogènes afin de réguler l’immunité cellulaire autonome, notamment les réponses associées à l’inflammasome, la restriction de la réplication microbienne et la modulation des processus cytosquelettiques et vésiculaires. Par son rôle au sein des réseaux de gènes stimulés par l’interféron, GBP1 contribue à façonner des programmes transcriptionnels de l’immunité innée qui influencent la présentation de l’antigène et la signalisation dépendante des cytokines. Une expression dérégulée de GBP1 est fréquemment utilisée comme marqueur d’une activité interféronique accrue et a été associée à une physiopathologie inflammatoire ainsi qu’à des états du microenvironnement tumoral immunitaire dans divers contextes pathologiques.

GBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GBP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GBP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GBP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GBP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GBP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GBP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GBP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GBP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.