Plasmide CRISPR d'Activation (h) GATAD1: sc-403468-ACT

GATAD1 (GATA zinc finger domain containing 1) code une protéine nucléaire se liant à l’ADN, impliquée dans le contrôle transcriptionnel associé à la chromatine grâce à son domaine doigt de zinc et à son interaction avec des complexes régulateurs. En modulant l’activité des promoteurs et des enhancers, GATAD1 peut influencer des programmes d’expression génique liés à la progression du cycle cellulaire, à la différenciation cellulaire et à la signalisation en réponse au stress. Une expression altérée ou des perturbations génétiques de GATAD1 ont été rapportées dans de multiples contextes tumoraux, ce qui justifie l’étude de son rôle dans les réseaux transcriptionnels oncogéniques et la dérégulation épigénétique. Cela fait de GATAD1 une cible utile pour explorer comment les régulateurs de la chromatine façonnent des voies en aval qui affectent la prolifération et la stabilité du génome.

GATAD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GATAD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GATAD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GATAD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GATAD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GATAD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GATAD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GATAD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GATAD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GATAD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.