GATA4 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-400122-LAC-2

Das humane GATA4-Gen kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an GATA-Motive bindet und Genprogramme reguliert, die die Herzentwicklung, die Differenzierung von Kardiomyozyten sowie die Bildung endodermabgeleiteter Organe einschließlich Leber und Pankreas steuern. GATA4 wirkt dabei mit Kofaktoren wie TBX5, NKX2-5 und FOG-Proteinen zusammen, um die Enhancer-Aktivität und den Chromatinzustand in Signalwegen zu modulieren, die Morphogenese, Zellschicksalsfestlegung und stressantwortliche Transkription im Herzen kontrollieren. Genetische Störungen oder eine veränderte Regulation von GATA4 sind mit angeborenen Herzfehlern assoziiert und wurden über Effekte auf linienspezifische Transkriptionsnetzwerke zudem mit kardialem Remodeling und ausgewählten Krebsarten in Verbindung gebracht. Die Geneditierung oder gezielte Perturbation von GATA4 wird häufig eingesetzt, um Enhancer-Funktionen aufzuklären, Entwicklungsphänotypen in iPSC-abgeleiteten Linien zu modellieren und Transkriptionsschaltkreise zu kartieren, indem Knockout-/Knock-in-Strategien mit RNA-seq und epigenomischem Profiling kombiniert werden.

GATA4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente GATA4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

GATA4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der GATA4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen GATA4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen GATA4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.