Plasmide Double Nickase (h) GATA3: sc-400134-NIC

GATA3 code un facteur de transcription à doigt de zinc qui se lie aux motifs GATA afin de contrôler la spécification des lignées et les programmes de différenciation, avec des rôles majeurs dans le développement des lymphocytes T, la polarisation Th2 et les décisions de destinée des cellules épithéliales. Dans les cellules immunitaires, GATA3 coordonne l’expression des gènes de cytokines et le remodelage de la chromatine pour façonner la signalisation inflammatoire de type 2, tandis que dans les contextes épithéliaux, il contribue au maintien des états de différenciation via la régulation de réseaux transcriptionnels. La perturbation des circuits régulés par GATA3 a été associée à une dérégulation immunitaire et à des altérations de la différenciation, ce qui en fait une cible largement étudiée du contrôle transcriptionnel, de l’identité cellulaire et de l’expression génique dépendante des stimuli. En tant que régulateur nucléaire, GATA3 est fréquemment étudié dans des travaux portant sur l’utilisation des enhancers, la coopération entre facteurs de transcription et les transitions d’état cellulaire.

GATA3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GATA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GATA3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GATA3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GATA3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.