Plasmide CRISPR d'Activation (m) GATA-6: sc-420498-ACT

Le gène murin Gata6 code le facteur de transcription à doigts de zinc GATA-6, un régulateur déterminant de la lignée impliqué dans le développement de l’endoderme et la différenciation épithéliale dans des tissus tels que le poumon, le pancréas, l’intestin et le cœur. GATA-6 se fixe sur des motifs GATA dans les enhancers et les promoteurs afin de coordonner des programmes géniques impliqués dans la morphogenèse, la spécification du destin cellulaire et le maintien des états différenciés, en s’intégrant souvent aux réseaux de signalisation associés à Wnt, BMP/TGF-β, FGF et Notch. En biologie adulte, une activité altérée de GATA-6 est liée à une dérégulation des processus de différenciation et de remodelage qui affectent l’homéostasie des organes et les réponses au stress. Des profils d’expression aberrants ont été étudiés dans des contextes incluant des malformations congénitales et un reprogrammation transcriptionnelle oncogénique, faisant de Gata6 un nœud utile pour l’exploration mécanistique des circuits de régulation génique pertinents pour le développement et les maladies.

GATA-6 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gata6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GATA-6 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gata6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gata6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GATA-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gata6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GATA-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GATA-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de Gata6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.