Plasmide CRISPR d'Activation (h) GATA-6: sc-400724-ACT

GATA6 code GATA-6, un facteur de transcription à doigt de zinc qui se lie aux motifs GATA afin de contrôler la spécification des lignages et les programmes de différenciation au cours du développement de l’endoderme et du système cardiovasculaire. Dans les cellules humaines, GATA-6 régule des réseaux transcriptionnels impliqués dans la maturation épithéliale, l’expression des gènes du muscle lisse et l’organogenèse, avec des effets en aval sur le contrôle du cycle cellulaire, le métabolisme et les voies de réponse au stress. Une activité dysrégulée de GATA6 ou des altérations du nombre de copies ont été associées à des anomalies du développement ainsi qu’à un remodelage pathologique de l’expression génique, pertinent pour des maladies, dans des contextes de cancer et de cardiométabolisme. Ces propriétés font de GATA-6 un nœud utile pour disséquer, dans des études mécanistiques, les circuits transcriptionnels, l’utilisation des enhancers et les transitions d’identité cellulaire.

GATA-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GATA6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GATA-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GATA6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GATA6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GATA-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GATA6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GATA-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GATA-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de GATA6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.