Plasmide CRISPR/Cas9 KO Gastrin (h): sc-403220

Présentation

GAST code la gastrine, une prohormone transformée en peptides bioactifs qui régulent la sécrétion d’acide gastrique et coordonnent la croissance ainsi que la différenciation de la muqueuse dans le tractus gastro-intestinal. En se liant au récepteur de la cholécystokinine B (CCKBR), la gastrine active des réseaux de signalisation couplés aux protéines G, notamment les voies PLC/IP3/Ca2+, PKC et MAPK/ERK, influençant la fonction sécrétoire et la prolifération épithéliale. Une production ou une signalisation de la gastrine dérégulée est associée à des modifications de la physiologie gastrique et a été étudiée dans le contexte de l’hypergastrinémie, de la biologie neuroendocrine gastrique et du remodelage lié à l’inflammation. En tant que gène de l’axe hormonal intestinal, GAST constitue un point d’entrée utile pour disséquer la communication endocrine–paracrine et les programmes transcriptionnels en aval dans des systèmes modèles gastriques et pancréatiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Gastrin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GAST dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GAST, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GAST à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Gastrin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GAST pour l'étude de la signalisation de Gastrin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GAST essentiels à la fonction de Gastrin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GAST pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Gastrin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Gastrin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GAST. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Gastrin plasmide HDR (h) et le Gastrin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GAST pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GAST définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.