Plasmide CRISPR/Cas9 KO gasdermin C (m): sc-429915

Présentation

Le gène murin **Gsdmc** code la gasdermine C, un membre de la famille des gasdermines impliqué dans la mort cellulaire régulée et la perméabilisation inflammatoire des membranes en aval de l’activation de protéases. Les gasdermines peuvent agir comme effecteurs de processus de type pyroptose en formant des pores dans la membrane plasmique, influençant ainsi la libération de cytokines, l’intégrité de la barrière épithéliale et la signalisation de l’immunité innée. L’expression de **Gsdmc** est enrichie dans les contextes épithéliaux et a été associée à des réponses au stress qui recoupent l’inflammation pilotée par NF-κB et des programmes de remodelage tissulaire. Une activité des gasdermines dérégulée est donc pertinente pour l’étude des pathologies inflammatoires, des interactions hôte–microbe et des phénotypes de mort cellulaire associés au cancer dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO gasdermin C (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gsdmc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gsdmc, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gsdmc à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine gasdermin C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gsdmc pour l'étude de la signalisation de gasdermin C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gsdmc essentiels à la fonction de gasdermin C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gsdmc pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le gasdermin C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le gasdermin C plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gsdmc. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le gasdermin C plasmide HDR (m) et le gasdermin C (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gsdmc pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gsdmc définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.