Plasmide CRISPR/Cas9 KO Gas6 (h): sc-400978

Présentation

Growth arrest–specific 6 (GAS6) code pour Gas6, un ligand sécrété dépendant de la vitamine K des récepteurs tyrosine kinase de la famille TAM : AXL, MERTK et TYRO3. La signalisation Gas6–TAM régule l’efférocytose, l’atténuation de l’immunité innée, la survie et la migration cellulaires via des voies incluant fréquemment PI3K–AKT, MAPK/ERK et NF-κB, avec des effets marqués sur la polarisation des macrophages et l’homéostasie endothéliale. Dans les tissus humains, l’activité de GAS6 contribue au dialogue croisé thrombo-inflammatoire et peut remodeler les interactions tumeur–système immunitaire ainsi que le comportement métastatique via des programmes dépendants d’AXL/MERTK. Une dérégulation de la signalisation de l’axe GAS6/TAM a été associée à la progression des cancers, à l’inflammation chronique, à la fibrose et à des atteintes vasculaires, ce qui en fait une cible fréquente des études mécanistiques sur la signalisation du microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Gas6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GAS6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GAS6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GAS6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Gas6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GAS6 pour l'étude de la signalisation de Gas6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GAS6 essentiels à la fonction de Gas6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GAS6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Gas6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Gas6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GAS6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Gas6 plasmide HDR (h) et le Gas6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GAS6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GAS6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.