Plasmide Double Nickase (h) GARNL4: sc-411668-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GARNL4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GARNL4 Double Nickase (h) et le plasmide GARNL4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RAP1GAP2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GARNL4 | sc-411668-NIC | 20 µg | $410.00 |
RAP1GAP2 code pour GARNL4, une protéine d’activation de la GTPase (GAP) de Rap qui accélère l’hydrolyse du GTP sur Rap1/Rap2 afin de limiter la signalisation des petites GTPases au niveau de la membrane plasmique et du cytosquelette. En modulant le contrôle, dépendant de Rap, de l’activation des intégrines, de l’adhérence cellulaire et du remodelage de l’actine, GARNL4 contribue à la régulation de la signalisation des plaquettes et des leucocytes, de leur trafic et de leurs réponses couplées aux stimuli. Cette voie RAP1 interfère avec des réseaux liés à MAPK/ERK et à PI3K via des récepteurs en amont et des complexes adaptateurs, façonnant les seuils d’activation cellulaire et la dynamique de sécrétion. Une signalisation Rap dérégulée et une activité GAP altérée sont fréquemment étudiées dans des contextes d’hémostase anormale, de signalisation inflammatoire et de modifications, associées au cancer, de l’adhérence et de la migration.
GARNL4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAP1GAP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAP1GAP2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAP1GAP2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAP1GAP2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.