Plasmide CRISPR/Cas9 KO GAP1m (m): sc-431130
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- GAP1m Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique GAP1m, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GAP1m Antibody (15): sc-135916
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO GAP1m (m) | sc-431130 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Rasa2 code la protéine d’activation de la GTPase Ras (Ras GTPase-activating protein) GAP1m, un régulateur négatif de la signalisation Ras qui accélère l’hydrolyse du GTP afin de limiter l’activité des voies MAPK/ERK et PI3K/AKT. En modulant l’amplitude et la durée de l’activité de Ras, GAP1m influence la progression du cycle cellulaire, les signaux de différenciation et la dynamique du cytosquelette qui façonnent la migration et l’adhérence. Dans des modèles murins, une altération de la fonction de Rasa2 a été associée à une dérégulation de la signalisation des facteurs de croissance ainsi qu’à des phénotypes immunitaires et développementaux aberrants, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier le remodelage des réseaux dépendants de Ras dans des contextes liés aux maladies. Sa position de « frein » de signalisation soutient des investigations mécanistiques sur la rétroaction des voies, l’intégration des signaux et l’engagement, dépendant du contexte, des effecteurs de Ras.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GAP1m (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rasa2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rasa2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rasa2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GAP1m.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rasa2 pour l'étude de la signalisation de GAP1m, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Rasa2 essentiels à la fonction de GAP1m
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rasa2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le GAP1m plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GAP1m plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rasa2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le GAP1m plasmide HDR (m) et le GAP1m (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rasa2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rasa2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.