GAP-43 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420484

Übersicht

Gap43 codiert das wachstumsassoziierte Protein 43 (GAP-43), ein neuronenreiches, membranassoziiertes Phosphoprotein, das in Wachstumskegeln und präsynaptischen Endigungen lokalisiert ist und dort das Neuritenwachstum, die Axonführung und den synaptischen Umbau reguliert. Die Funktion von GAP-43 ist eng mit der Dynamik des Aktin-Zytoskeletts und calciumabhängiger Signalübertragung verknüpft, einschließlich einer PKC-vermittelten Phosphorylierung, die Membraninteraktionen und plastizitätsassoziierte Prozesse moduliert. Bei der Maus nimmt die Gap43-Expression während der Entwicklung und nach neuronalen Verletzungen zu, wodurch es ein häufig verwendeter molekularer Marker für Axonwachstum und regenerative Antworten ist. Eine fehlregulierte, GAP-43-abhängige Umgestaltung neuronaler Schaltkreise wurde mit veränderter synaptischer Konnektivität in Modellen neuroentwicklungsbedingter und neurodegenerativer Erkrankungen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Studien der Funktion neuronaler Netzwerke unterstreicht.

Das GAP-43 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Gap43-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Gap43-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Gap43 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GAP-43-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Gap43-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GAP-43-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Gap43-Exone abzielen, die für die GAP-43-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Gap43-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GAP-43 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom GAP-43 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Gap43-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GAP-43 HDR-Plasmid (m) und GAP-43 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Gap43-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Gap43-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.