Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO GAP-43 (h): sc-400632
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- GAP-43 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique GAP-43, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GAP-43 Antibody (B-5): sc-17790
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO GAP-43 (h) | sc-400632 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
GAP43 code pour la protéine associée à la croissance 43 (GAP-43), une phosphoprotéine associée à la membrane, enrichie dans les cônes de croissance neuronaux et les terminaisons présynaptiques, qui favorise l’allongement des axones, leur guidage et le remodelage synaptique. GAP-43 interagit avec la calmoduline et constitue un substrat majeur de la PKC, reliant la signalisation calcique au contrôle, dépendant de la phosphorylation, de la dynamique du cytosquelette et du trafic vésiculaire. En raison de ses rôles dans l’extension des neurites et dans des programmes transcriptionnels liés à la plasticité, GAP-43 est largement utilisée comme marqueur des états régénératifs et développementaux du système nerveux. Des altérations de l’expression et de la phosphorylation de GAP-43 ont été étudiées dans le cadre de processus neurodéveloppementaux et neurodégénératifs où la connectivité synaptique et le maintien des axones sont perturbés.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GAP-43 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GAP43 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GAP43, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GAP43 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GAP-43.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GAP43 pour l'étude de la signalisation de GAP-43, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de GAP43 essentiels à la fonction de GAP-43
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GAP43 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le GAP-43 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GAP-43 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GAP43. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le GAP-43 plasmide HDR (h) et le GAP-43 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GAP43 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GAP43 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.