Plasmide CRISPR d'Activation (m) gametogenetin: sc-434015-ACT

Le gène murin **Ggn** code la gamétogénétine, une protéine enrichie dans les cellules germinales, impliquée dans la spermatogenèse et des programmes de différenciation spécifiques au testicule. Les profils d’expression suggèrent une participation à la maturation des cellules germinales post-méiotiques, avec des rôles potentiels dans le remodelage du cytosquelette et des événements de trafic protéique qui soutiennent le développement des spermatozoïdes. La dérégulation de facteurs exprimés dans la lignée germinale tels que **Ggn** est fréquemment exploitée pour étudier les voies qui gouvernent la fertilité, la survie des cellules germinales et le contrôle des gènes du développement. Dans les contextes de recherche biomédicale, **Ggn** constitue un marqueur utile et un nœud fonctionnel pour disséquer les réseaux transcriptionnels actifs dans la lignée reproductrice mâle.

gametogenetin Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ggn sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

gametogenetin Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ggn dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ggn, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de gametogenetin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ggn natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de gametogenetin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie gametogenetin dans les cellules tumorales présentant une expression de Ggn silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.