GALR3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406303

Panoramica

GALR3 codifica il recettore 3 della galanina, un GPCR di classe A che lega il neuropeptide galanina e ligandi correlati per modulare l’eccitabilità neuronale e la segnalazione neuroendocrina. Una volta attivato, GALR3 si accoppia principalmente a proteine G inibitorie, influenzando l’attività dell’adenilil ciclasi, la regolazione dei canali ionici e le reti di segnalazione a valle collegate alle MAPK, plasmando così il rilascio di neurotrasmettitori e i circuiti responsivi allo stress. L’espressione di GALR3 nel sistema nervoso centrale e nei tessuti periferici lo collega a vie che controllano l’umore, la nocicezione, il comportamento alimentare e la regolazione autonomica. L’alterazione della segnalazione galanina–recettore, incluse variazioni nell’espressione o nell’attività di GALR3, è stata esplorata nel contesto di fenotipi neuropsichiatrici e neurologici e in studi più ampi sulla trasduzione del segnale mediata dai GPCR.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GALR3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GALR3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GALR3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GALR3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GALR3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GALR3 per lo studio della segnalazione di GALR3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GALR3 critici per la funzione di GALR3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GALR3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GALR3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GALR3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GALR3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GALR3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GALR3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GALR3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GALR3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.