GALR3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406303

Descripción general

GALR3 codifica el receptor 3 de galanina, un GPCR de clase A que se une al neuropéptido galanina y a ligandos relacionados para modular la excitabilidad neuronal y la señalización neuroendocrina. Tras su activación, GALR3 se acopla principalmente a proteínas G inhibidoras para influir en la actividad de la adenilil ciclasa, la regulación de canales iónicos y redes de señalización posteriores vinculadas a MAPK, moldeando así la liberación de neurotransmisores y los circuitos sensibles al estrés. La expresión de GALR3 en el sistema nervioso central y en tejidos periféricos lo vincula a vías que controlan el estado de ánimo, la nocicepción, la conducta alimentaria y la regulación autónoma. La alteración de la señalización galanina–receptor, incluidos cambios en la expresión o actividad de GALR3, se ha investigado en el contexto de fenotipos neuropsiquiátricos y neurológicos, así como en estudios más amplios sobre la transducción de señales mediada por GPCR.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GALR3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GALR3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GALR3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GALR3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GALR3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GALR3 para la investigación de la señalización de GALR3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GALR3 críticos para la función de GALR3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GALR3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GALR3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GALR3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GALR3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GALR3 (h) y el plásmido HDR GALR3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GALR3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GALR3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.