Plasmide Double Nickase (h) galectin-8: sc-401785-NIC

LGALS8 code la galectine-8, une lectine à répétitions en tandem se liant aux β-galactosides, qui agit comme un capteur dépendant des glycannes des dommages membranaires et comme un modulateur des interactions cellule–cellule et cellule–matrice. La galectine-8 participe à l’autophagie sélective en reconnaissant les glycannes exposés sur les endomembranes rompues et en recrutant des effecteurs en aval qui favorisent la xénophagie et l’élimination des vésicules endommagées. Elle influence également la signalisation des intégrines, l’adhérence cellulaire et le trafic intracellulaire, reliant la reconnaissance des glycoprotéines extracellulaires aux voies intracellulaires de réponse au stress. Une expression dérégulée de LGALS8 et la signalisation médiée par les lectines ont été associées à des processus inflammatoires, aux interactions hôte–pathogène et à des phénotypes liés au cancer, tels qu’une adhérence et une invasion altérées, ce qui étaye des études mécanistiques dans des contextes immunitaires et épithéliaux.

galectin-8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LGALS8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LGALS8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LGALS8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LGALS8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.