Plasmide CRISPR/Cas9 KO galectin-6 (m): sc-421418

Présentation

Le gène murin Lgals6 code la galectine‑6, une lectine se liant aux β‑galactosides, impliquée dans des événements de reconnaissance dépendants des glucides à la surface cellulaire et dans le milieu extracellulaire. En tant que membre de la famille des galectines, la galectine‑6 peut influencer les interactions cellule‑cellule et cellule‑matrice, l’organisation du réseau de glycoprotéines et des processus en aval tels que la régulation de la barrière épithéliale et la signalisation des cellules immunitaires. Les voies pilotées par les galectines sont souvent associées à la modulation de l’inflammation, au recrutement des leucocytes et au remodelage tissulaire via des interactions avec des récepteurs glycosylés et des composants de la matrice extracellulaire. Une signalisation lectine–glycane dérégulée a été associée à des phénotypes inflammatoires et fibrosants dans de multiples tissus, faisant de Lgals6 une cible pertinente pour des études mécanistiques d’immunobiologie des muqueuses et de régulation du microenvironnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO galectin-6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lgals6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lgals6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lgals6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine galectin-6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lgals6 pour l'étude de la signalisation de galectin-6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lgals6 essentiels à la fonction de galectin-6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lgals6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le galectin-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le galectin-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lgals6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le galectin-6 plasmide HDR (m) et le galectin-6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lgals6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lgals6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.