Plasmide CRISPR d'Activation (h) galectin-3: sc-417680-ACT

Le gène humain **LGALS3** code la galectine‑3, une lectine liant les **β‑galactosides** qui régule les interactions cellule–cellule et cellule–matrice, l’endocytose et la signalisation intracellulaire au sein des compartiments épithéliaux et immunitaires. La galectine‑3 module des voies liées à l’inflammation et à l’immunité innée, notamment l’activation des macrophages, des programmes transcriptionnels associés à **NF‑κB** et le remodelage induit par les cytokines, et elle peut, selon le contexte, influencer la résistance à l’apoptose, l’autophagie et les réponses au stress oxydant. Par ses rôles dans l’adhésion, la migration et le renouvellement de la matrice extracellulaire, **LGALS3** est fréquemment étudié en biologie de la fibrose et dans les interactions croisées du microenvironnement tumoral, ainsi que dans des processus cardiométaboliques et neuro‑inflammatoires. Une expression dérégulée de la galectine‑3 a été associée à des états inflammatoires chroniques et à des phénotypes de progression dans de nombreux cancers, ce qui en fait un nœud moléculaire largement utilisé pour l’étude mécanistique des voies de signalisation.

galectin-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LGALS3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

galectin-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LGALS3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LGALS3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de galectin-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LGALS3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de galectin-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie galectin-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de LGALS3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.