Plasmide CRISPR/Cas9 KO GADD 45γ (h): sc-402483

Présentation

GADD45G (GADD45γ) est un membre inductible par le stress de la famille des protéines GADD45 (Growth Arrest and DNA Damage–Inducible), qui relie les signaux génotoxiques et inflammatoires au contrôle du cycle cellulaire, à la réparation de l’ADN et à l’apoptose. Il module la signalisation MAPK, notamment les voies p38 et JNK, et s’articule avec la régulation des points de contrôle afin de favoriser l’arrêt du cycle en G2/M et le maintien de la stabilité génomique en situation de stress cellulaire. Dans les cellules humaines, une expression altérée de GADD45γ a été associée à une prolifération dérégulée, à des réponses au stress déficientes et à une signalisation de survie anormale dans plusieurs contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud pertinent pour les études mécanistiques de l’adaptation au stress. Son rôle d’intégrateur entre stimuli environnementaux et programmes transcriptionnels et de points de contrôle soutient la recherche sur les réponses aux dommages de l’ADN, la sénescence et des voies de type suppresseur de tumeur.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GADD 45γ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GADD45G dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GADD45G, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GADD45G à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GADD 45γ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GADD45G pour l'étude de la signalisation de GADD 45γ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GADD45G essentiels à la fonction de GADD 45γ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GADD45G pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GADD 45γ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GADD 45γ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GADD45G. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GADD 45γ plasmide HDR (h) et le GADD 45γ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GADD45G pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GADD45G définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.