Plasmide Double Nickase (h) GADD 34: sc-400595-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GADD 34 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GADD 34 Double Nickase (h) et le plasmide GADD 34 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PPP1R15A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GADD 34 Antibody (B-10): sc-373815
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GADD 34 | sc-400595-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GADD 34 | sc-400595-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP1R15A code pour GADD34, une sous-unité régulatrice inductible de la protéine phosphatase 1 qui favorise la déphosphorylation de l’eIF2α afin de mettre fin à la réponse intégrée au stress et de rétablir la traduction après un stress cellulaire. GADD34 est surexprimée en aval du stress du réticulum endoplasmique (RE) et des voies de signalisation liées aux dommages de l’ADN, et module la protéostasie, la susceptibilité à l’apoptose ainsi que le contrôle en rétroaction de la réponse aux protéines mal repliées (UPR). En contrôlant la dynamique de phosphorylation de l’eIF2α, PPP1R15A influence les programmes transcriptionnels associés à ATF4/CHOP et le remodelage adaptatif de l’expression génique en situation de stress. La dérégulation de cet axe a été associée à des états pathologiques caractérisés par un stress chronique du RE et une tolérance au stress altérée, ce qui justifie son étude dans la neurodégénérescence, le stress métabolique et la biologie des cellules cancéreuses.
GADD 34 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PPP1R15A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PPP1R15A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PPP1R15A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PPP1R15A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.