Plasmide Double Nickase (h) GAD-67: sc-400588-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GAD-67 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GAD-67 Double Nickase (h) et le plasmide GAD-67 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GAD1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GAD-67 Antibody (F-6): sc-28376
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GAD-67 | sc-400588-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GAD-67 | sc-400588-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **GAD1** code la glutamate décarboxylase 67 (**GAD-67**), une enzyme cytosolique clé qui catalyse la conversion du glutamate en **acide γ‑aminobutyrique (GABA)**, contribuant au maintien de la neurotransmission inhibitrice dans le système nerveux central. GAD-67 soutient la production basale de GABA et influence l’équilibre synaptique, l’excitabilité neuronale et la plasticité dépendante de l’activité via la régulation des réserves intracellulaires de neurotransmetteurs. Des altérations de l’expression ou de la régulation de **GAD1/GAD-67** ont été associées à une perturbation de l’homéostasie excitation–inhibition et ont été étudiées dans le contexte de troubles neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, notamment la schizophrénie, le trouble du spectre de l’autisme et des phénotypes liés à l’épilepsie. En tant que marqueur et déterminant fonctionnel de l’identité des neurones GABAergiques, GAD-67 est couramment utilisée pour étudier la formation et la maturation des circuits inhibiteurs, ainsi que le métabolisme des neurotransmetteurs en réponse au stress.
GAD-67 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GAD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GAD1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GAD1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GAD1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.