Plasmide Double Nickase (h) GABA_B R1: sc-401714-NIC

GABBR1 code pour la sous-unité 1 du récepteur humain GABA\_B (GABA\_B R1), un composant indispensable des récepteurs couplés aux protéines G hétérodimériques qui assurent une neurotransmission inhibitrice lente dans le système nerveux central. Lors de l’activation, la signalisation via GABA\_B se couple aux protéines G\_i/o pour inhiber l’adénylate cyclase, moduler les voies cAMP/PKA, réguler l’activité des canaux calciques et potassiques, et supprimer la libération de neurotransmetteurs aux sites pré- et postsynaptiques. Cette voie influence l’excitabilité neuronale, la plasticité synaptique et les oscillations des réseaux, reliant ainsi GABBR1 à des mécanismes qui façonnent le fonctionnement des circuits. Des altérations du tonus inhibiteur GABAergique et une dérégulation de la signalisation du récepteur GABA\_B ont été étudiées dans le contexte de phénotypes neurologiques et neuropsychiatriques, ce qui soutient l’utilisation de modèles de perturbation de GABBR1 pour des études mécanistiques.

GABAB R1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GABBR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GABBR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GABBR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GABBR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.