GABA_A Rθ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406766

Descripción general

GABRQ codifica la subunidad θ (theta) del receptor GABA\(_A\), un canal de cloruro pentamérico activado por ligando que media la neurotransmisión inhibitoria rápida en el sistema nervioso central humano. Al regular la entrada de cloruro y la hiperpolarización de la membrana, los receptores GABA\(_A\) modulan la excitabilidad neuronal, la integración sináptica y las oscilaciones de red, y se conectan funcionalmente con vías que controlan la dinámica del calcio, la liberación de neurotransmisores y la expresión génica dependiente de la actividad. La variación del tono inhibitorio que involucra subunidades específicas del receptor se asocia con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, y puede influir en la susceptibilidad a disfunciones de circuitos relacionadas con crisis epilépticas y con el estrés. La composición de subunidades, el tráfico intracelular y la farmacología del receptor son determinantes clave de la función de las sinapsis inhibitorias, lo que convierte a GABRQ en una diana útil para desentrañar los mecanismos de la señalización gabaérgica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GABAA Rθ (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GABRQ en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GABRQ junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GABRQ tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GABAA Rθ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GABRQ para la investigación de la señalización de GABAA Rθ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GABRQ críticos para la función de GABAA Rθ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GABRQ para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GABAA Rθ CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GABAA Rθ CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GABRQ. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GABAA Rθ (h) y el plásmido HDR GABAA Rθ (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GABRQ para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GABRQ definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.