Plasmide CRISPR/Cas9 KO GABA_A Rθ (h): sc-406766

Présentation

GABRQ code pour la sous-unité θ (thêta) du récepteur GABA\(_A\), un canal chlorure pentamérique activé par un ligand qui assure la neurotransmission inhibitrice rapide dans le système nerveux central humain. En régulant l’entrée de chlorure et l’hyperpolarisation membranaire, les récepteurs GABA\(_A\) modulent l’excitabilité neuronale, l’intégration synaptique et les oscillations des réseaux, et interagissent fonctionnellement avec des voies qui contrôlent la dynamique du calcium, la libération de neurotransmetteurs et l’expression génique dépendante de l’activité. Des variations du tonus inhibiteur impliquant des sous-unités spécifiques du récepteur sont associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques et peuvent influencer la susceptibilité à des dysfonctionnements des circuits liés aux crises et au stress. La composition en sous-unités, le trafic intracellulaire et la pharmacologie du récepteur sont des déterminants essentiels de la fonction des synapses inhibitrices, ce qui fait de GABRQ une cible utile pour disséquer les mécanismes de la signalisation GABAergique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GABAA Rθ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GABRQ dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GABRQ, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GABRQ à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GABAA Rθ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GABRQ pour l'étude de la signalisation de GABAA Rθ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GABRQ essentiels à la fonction de GABAA Rθ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GABRQ pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GABAA Rθ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GABAA Rθ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GABRQ. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GABAA Rθ plasmide HDR (h) et le GABAA Rθ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GABRQ pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GABRQ définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.