Particules Lentivirales d'Activation (h) GABA_A Rδ: sc-401954-LAC

GABRD code la sous-unité δ du récepteur humain GABA\_A, un canal chlorure ionotrope activé par un ligand qui médie la neurotransmission inhibitrice. Les récepteurs contenant la sous-unité δ sont enrichis aux sites extrasynaptiques, où ils contribuent à l’inhibition tonique, modulant l’excitabilité neuronale et les oscillations des réseaux via une conductance chlorure soutenue. En modulant le potentiel de membrane et l’intégration synaptique, GABA\_A Rδ influence des voies liées à l’équilibre excitation–inhibition, à la plasticité synaptique et à la signalisation dépendante de l’activité. Des altérations de l’expression ou de la fonction de GABRD ont été étudiées dans le contexte de phénotypes neuropsychiatriques et neurologiques où le tonus inhibiteur est perturbé, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans des modèles de circuits et cellulaires.

Les particules d'activation lentivirales GABAA Rδ (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de GABRD dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GABAA Rδ (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription GABRD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GABAA Rδ. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif GABRD ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.