Plasmide Double Nickase (h) GABAA Rδ: sc-401954-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GABAA Rδ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GABAA Rδ Double Nickase (h) et le plasmide GABAA Rδ Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GABRD. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GABAA Rδ Antibody (H-4): sc-271231
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GABAA Rδ | sc-401954-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GABAA Rδ | sc-401954-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GABRD code la sous-unité δ du récepteur humain GABA\_A (GABA\_A Rδ), un canal chlorure inhibiteur activé par un ligand, qui contribue de manière majeure aux récepteurs extrasynaptiques responsables de l’inhibition tonique dans les neurones. En modulant l’excitabilité membranaire et l’intégration synaptique, les récepteurs GABA\_A contenant la sous-unité δ influencent les oscillations des réseaux et l’équilibre de la neurotransmission au sein des voies de signalisation GABAergiques. L’expression de GABRD et la composition du récepteur sont étroitement régulées au cours du développement et en réponse aux neurostéroïdes, reliant cette sous-unité à une plasticité dépendante de l’activité. Des altérations de la fonction ou de l’expression de la sous-unité δ ont été associées à des phénotypes neurologiques et neuropsychiatriques, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques de la signalisation inhibitrice et du dysfonctionnement des circuits.
GABAA Rδ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GABRD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GABRD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GABRD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GABRD.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.