Plasmide Double Nickase (h) GABA_A Rβ3: sc-403007-NIC

GABRB3 code la sous-unité β3 du récepteur GABA\_A humain, un composant essentiel des canaux chlorure activés par ligand qui assurent une neurotransmission inhibitrice rapide dans le système nerveux central. L’incorporation de β3 influence l’assemblage du récepteur, son trafic vers la surface cellulaire et ses propriétés pharmacologiques, modulant l’excitabilité neuronale via la signalisation GABAergique synaptique et extrasynaptique. L’activité des récepteurs GABA\_A est couplée à la régulation du potentiel de membrane et aux oscillations des réseaux neuronaux, avec des effets en aval sur la maturation des synapses et la plasticité dépendante de l’activité. Des variations génétiques ou une expression dérégulée de GABRB3 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et liés aux crises convulsives, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques des dysfonctionnements des circuits inhibiteurs.

GABAA Rβ3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GABRB3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GABRB3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GABRB3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GABRB3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.