Plasmide CRISPR d'Activation (h) GABA_A Rα3: sc-403044-ACT

GABRA3 code la sous-unité alpha 3 du récepteur humain de l’acide γ-aminobutyrique de type A (GABAA Rα3), un composant de canal chlorure ligand‑dépendant qui médie une neurotransmission inhibitrice rapide. L’incorporation de la sous-unité α3 dans les récepteurs GABAA pentamériques module l’ouverture du canal, la pharmacologie, ainsi que le niveau d’inhibition synaptique versus extrasynaptique, influençant l’excitabilité neuronale et les oscillations des réseaux. GABAA Rα3 participe au fonctionnement des synapses GABAergiques et à des processus neurodéveloppementaux plus larges, notamment la croissance des neurites et la maturation des circuits, via une signalisation dépendante de l’activité. Des travaux de recherche ont associé une expression altérée de GABRA3 ou un déséquilibre de la signalisation inhibitrice à des phénotypes neurologiques et à des états liés à des maladies, dans lesquels une perturbation de l’équilibre excitation–inhibition contribue à la physiopathologie.

GABAA Rα3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GABRA3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GABAA Rα3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GABRA3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GABRA3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GABAA Rα3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GABRA3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GABAA Rα3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GABAA Rα3 dans les cellules tumorales présentant une expression de GABRA3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.