Plasmide Double Nickase (h) GABA_A Rα2: sc-402715-NIC

GABRA2 code la sous-unité α2 du récepteur humain GABA\(_A\), un composant central des canaux chlorure pentamériques activés par un ligand, qui assurent une neurotransmission inhibitrice rapide dans le système nerveux central. En modulant la conductance au chlorure, GABA\(_A\)Rα2 influence l’excitabilité neuronale, l’intégration synaptique et les oscillations des réseaux, ce qui la relie au fonctionnement des circuits dépendant de l’activité et à l’équilibre excitation–inhibition. Cette sous-unité du récepteur participe à la signalisation des synapses GABAergiques et interagit avec la machinerie d’échafaudage et de trafic qui régit la localisation du récepteur et sa désensibilisation. Des variations génétiques et régulatrices de GABRA2 ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et neurologiques, ce qui soutient sa pertinence pour des études mécanistiques dans des modèles neuronaux.

GABAA Rα2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GABRA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GABRA2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GABRA2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GABRA2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.