Plasmide Double Nickase (h) GABA_A Rα1: sc-401038-NIC

GABRA1 code la sous-unité α1 du récepteur humain GABA\(_A\), un composant central des canaux chlorure pentamériques activés par un ligand qui assurent une neurotransmission inhibitrice rapide dans le système nerveux central. En s’assemblant avec les sous-unités β et γ, GABA\(_A\) Rα1 module la cinétique d’ouverture/fermeture du canal, la localisation synaptique des récepteurs et l’excitabilité des réseaux neuronaux en aval de la signalisation des synapses GABAergiques. Son activité influence des processus tels que la plasticité synaptique, le fonctionnement des circuits oscillatoires et l’équilibre excitation–inhibition. Des altérations génétiques et fonctionnelles de GABRA1 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et liés aux crises convulsives, ce qui étaye sa pertinence pour des études mécanistiques des dysfonctionnements de la signalisation inhibitrice.

GABAA Rα1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GABRA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GABRA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GABRA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GABRA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.