Plasmide Double Nickase (h) Gab 1: sc-401108-NIC

GAB1 code la protéine 1 liant GRB2 (Gab1), un adaptateur d’échafaudage qui intègre les signaux en aval des récepteurs à activité tyrosine kinase (RTK) et des récepteurs de cytokines afin de coordonner des programmes de prolifération, de survie, de migration et de différenciation. Après activation du récepteur, Gab1 est phosphorylée sur des tyrosines et recrute des effecteurs tels que la sous-unité p85 de la PI3K, SHP2 et PLCγ, reliant les signaux amont aux réseaux PI3K–AKT, RAS–ERK/MAPK et à d’autres voies de signalisation dépendantes des phosphotyrosines. Ces voies régulent le remodelage du cytosquelette et la motilité cellulaire et sont essentielles aux réponses aux facteurs de croissance dans de nombreux tissus. Une signalisation Gab1 dérégulée a été associée à l’activité aberrante des voies des RTK observée en oncologie, ainsi qu’à des altérations de la signalisation inflammatoire et métabolique dans des modèles cellulaires pertinents pour certaines pathologies.

Gab 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GAB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GAB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GAB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GAB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.