Plasmide CRISPR d'Activation (h) Gab 1: sc-401108-ACT

Le gène humain **GAB1** code Gab1, un adaptateur d’échafaudage qui intègre les signaux des récepteurs à activité tyrosine kinase (RTK) et des récepteurs de cytokines afin de coordonner des cascades en aval contrôlant la prolifération, la survie, la migration et la différenciation. Après phosphorylation sur tyrosine, Gab1 recrute des effecteurs à domaine SH2 tels que PTPN11/SHP2 et la sous-unité p85 de la PI3K, reliant les récepteurs en amont aux voies MAPK/ERK et PI3K–AKT, ainsi qu’aux processus associés du cytosquelette et du trafic vésiculaire. La signalisation dépendante de Gab1 contribue à la régulation de la morphogenèse épithéliale, de l’activation des cellules immunitaires et des réponses aux facteurs de croissance. Une expression ou une phosphorylation dérégulée de GAB1 a été associée à une sortie anormale des voies RTK observée dans de multiples contextes pathologiques, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans les études de voies et de réseaux.

Gab 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GAB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Gab 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GAB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GAB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Gab 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GAB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Gab 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Gab 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GAB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.