Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) G6PD: sc-401019-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) G6PD correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide G6PD Double Nickase (h) et le plasmide G6PD Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant G6PD. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: G6PD Antibody (G-12): sc-373886
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) G6PD | sc-401019-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) G6PD | sc-401019-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain G6PD code la glucose-6-phosphate déshydrogénase, l’enzyme limitante de la voie oxydative des pentoses phosphates, qui génère du NADPH et du ribose-5-phosphate. Le NADPH soutient la biosynthèse réductrice et maintient le glutathion à l’état réduit, ce qui relie l’activité de G6PD à l’homéostasie redox cellulaire et à la protection contre le stress oxydant. La fonction de G6PD influence les flux métaboliques, la synthèse des nucléotides et les réponses aux espèces réactives de l’oxygène dans les érythrocytes et de nombreux types cellulaires prolifératifs. Les variations génétiques ou une activité enzymatique réduite sont associées au déficit en G6PD et peuvent moduler, dans certains contextes, la susceptibilité aux dommages oxydatifs et au stress hémolytique, faisant de G6PD une cible centrale pour l’étude de la biologie redox et du métabolisme.
G6PD Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus G6PD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de G6PD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de G6PD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de G6PD.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.