Particules Lentivirales d'Activation (h) G3BP1: sc-400745-LAC

G3BP1 (protéine 1 se liant à la protéine Ras GTPase-activating) est une protéine liant l’ARN qui agit comme un nucléateur central des granules de stress cytoplasmiques, en coordonnant le tri des ARNm, la répression de la traduction et la stabilité des ARN lors d’un stress cellulaire. Par l’intermédiaire de ses domaines RRM et RGG, G3BP1 intègre la signalisation et le métabolisme de l’ARN en mobilisant des voies associées aux réponses immunitaires innées antivirales, à la signalisation MAPK/ERK et au remodelage des RNP. Elle s’inscrit également dans les programmes de réponse aux dommages de l’ADN et au stress de réplication via la régulation du devenir des transcrits et des réseaux d’interactions protéine‑protéine qui orientent les décisions de survie cellulaire. Une activité dérégulée de G3BP1 a été associée à une dynamique anormale des granules de stress et à des circuits de régulation de l’ARN altérés, observés en oncologie, dans les maladies neurodégénératives et dans les interactions virus‑hôte, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des phénotypes d’adaptation au stress.

Les particules d'activation lentivirales G3BP1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de G3BP1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales G3BP1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription G3BP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de G3BP1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif G3BP1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.